Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型式糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失胰脏自身抗形体到消失1同型癌症外科疼痛的十分困难率在儿童时期就有很好的描述，多个胰脏自身抗形体非典型的儿童里有70%在血清转换后10年底患上癌症，而随访15年的儿童这一百分比提高到84%。相对来说之下，占到外科1同型癌症一半以上的同型1同型癌症的发作机制还没有赢取充分的数据分析。

越来越多的人开始采用分期管理系统来定义1同型癌症的十分困难：个形体在消失多种胰脏自身抗形体时踏入第1期中，消失血糖间歇性时踏入第2期中，消失疼痛时踏入第3期中。一些多发胰脏自身抗形体非典型的个形体，在1期和2期，十分困难较较慢，并发展为发作的1同型癌症。我们之前描述了一组在首次检测到多种胰脏自身抗形体样本后至少10年无癌症的极较慢十分困难者，这组患儿人数少，但特征更为明确。随后，我们发现胰脏自身复合物特异性CD8+T巨噬细胞重排在十分困难缓较慢的患儿里基本不依赖于，但在近期发作和值得注意的癌症患儿里很容易检测到。这可能表明，与十分困难患儿相对来说，这些患儿化脓性重排的调控增强。

早期数据分析表明，尽管调控性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但癌症患儿依赖于一些机制不足之处，其里包括对IL-2的重排战斗能力降低。此外，癌症患儿里的effectCD4+T巨噬细胞可能对调控更加具抵抗性，乏善可陈为effectT巨噬细胞的诱发减弱，自然诱发的Treg和形体外诱发的正向Treg，以及复合物经历的CD4+T巨噬细胞里IL-2重排减弱。本数据分析的目的是描述了CD4+调控性T巨噬细胞(Treg)在一小群极缓较慢十分困难者里的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以人群为基础的纵向数据分析，在21岁以下确诊的患儿亲属里检查1同型癌症的危险因素。我们之前描述了长期缓较慢十分困难者的特征，他们保持多重胰脏自身抗形体非典型多达10年，但没有消失癌症的外科疼痛，较慢性或非展开性化脓性。随后，10名继续保持无癌症并愿意提供大量血液样本的缓较慢十分困难者纳入T和B巨噬细胞机制分析。在现阶段的数据分析里，8名较慢十分困难者(SP组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的胰脏自身抗形体非典型。所有的自发性都处于1同型癌症十分困难的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗形体对某些复合物的水痘，然而，一名患儿已经处于2期至少6年，但没有消失外科疼痛，一名患儿被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里对该供形体展开了单独分析报告。分离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞诱发试验车分析报告供形体里Treg的增益、表同型和机制。采用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)展开无全权负责聚类分析，分析报告Treg表同型。

结果：与心理健康供形体相对来说，来自较慢十分困难形体的思绪CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类标示出，激活的思绪CD4+ Treg增益提高，与免疫抑制正向的TNFR相关复合物(GITR)表述提高有关。一名HbA1c增大的患儿与十分困难缓较慢者和归一化的实验组相对来说，Treg著者有所不同。机制分析表明，与心理健康供形体相对来说，来自缓较慢十分困难形体的Treg介导的CD4+effectT巨噬细胞诱发微小损害。乏善可陈为对effectCD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的诱发提高。

三幅1 深入的表同型分析标示出，CD4+Treg亚同型在较慢十分困难队列里提高。由FlowSOM分解成的Treg室，挤满在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物表述深入研究出10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)采用9个不同Treg上面分解成的10个元簇的MST。每个节点推选一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在节点组周围着色。每个节点里的碗三幅坚称单个上面的表述分级。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出整形体上面表述。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)分解成三幅，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对数量级为每个metacluster筒新线三幅(数量级> 0.05%)确定为HD和SP组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。蓝色格子推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 采用CITRUS的预测模同型断定，Treg增益的提高是十分困难缓较慢的标志。分级相关联(a - f)和橄榄分析(g-k)较为SP自发性和归一化的HD自发性在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相似之处。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的推选性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)组以及供形体SP 606(蓝色)里CD25+ cd127的增益汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的筒新线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度著色，对角突出的簇被鉴别为SP和HD队列中间的不同。(j)筒新线三幅标示出了在SP(虎纹)和HD(灰点)组里，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对数量级(百分比)。(k)直方三幅标示出每个簇的表同型(粉红色)和Treg上面相对表述与着重表述(蓝色);上列，磁盘Treg_3;比如说一行，磁盘Treg_4。着重与所有其他簇里上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与心理健康献血者相对来说，十分困难缓较慢者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，标示出直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有供形体包括，p< 0.05(蓝色)供形体SP 606和归一化的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表述，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，标示出直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自缓较慢十分困难的CD4+ treg巨噬细胞控制effectCD4+T巨噬细胞的战斗能力降低。SP组用蓝色的新线和格子坚称，HD组用黑色的新线和格子坚称，蓝色的新线/格子坚称供形体sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按捕捉到的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培养出来3天后展开流式巨噬细胞术检测。(a-d)与CD4+这样的话者相对应的treg培养出来(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养出来。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱发比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发比率。采用非典型相异(激活的响应巨噬细胞不含treg)计算诱发比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

三幅5 effectCD4+T巨噬细胞对缓较慢十分困难的T巨噬细胞活化的诱发更加敏感。SP组用蓝色的新线和格子坚称，HD组用黑色的新线和格子坚称，蓝色的新线/格子坚称供形体sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按捕捉到的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培养出来3天后展开流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬生长因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者携手培养出来。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱发花红(b)。(c,d) CD25诱发花红(c)和CD134诱发花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授出来里的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

结论：我们算出的结论是，来自缓较慢十分困难子的活化思绪CD4+Treg在GITR表述里赢取了扩大和丰富，强调了全面数据分析Treg在1同型癌症风险个形体里的异质性的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28